本書將詳細介紹以黑果枸杞莖、葉和未開放花朵為外植體的組織培養(yǎng)（組培），組培植株移栽及養(yǎng)護，組培植株刺表型及其發(fā)育觀察，蔗糖促進黑果枸杞組培無性系枝刺發(fā)生的機理探索，生長素IAA抑制黑果枸杞組培無性系枝刺發(fā)生機理探索，基于穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化研究LrSUS對黑果枸杞枝刺發(fā)生的影響這幾部分內(nèi)容。

第1章 以黑果枸杞莖、葉為外植體的組培及其體細胞無性系變異

1.1 材料與方法

1.1.1 試驗材料

1.1.2 試驗方法

1.1.3 數(shù)據(jù)分析

1.2 結(jié)果與分析

1.2.1 黑果枸杞愈傷組織、不定芽及叢生芽的誘導(dǎo)

1.2.2 MSAP分析

1.3 討論與結(jié)論

1.3.1 黑果枸杞微繁殖

1.3.2 DNA甲基化變異與位點特異性MSAP

1.3.3 結(jié)論

第2章 以黑果枸杞未開放花朵為外植體的組培及玻璃化去除

2.1 材料與方法

2.1.1 試驗材料

2.1.2 無菌材料的獲取

2.1.3 外植體誘導(dǎo)脫分化和再分化

2.1.4 饑餓干燥結(jié)合AgNO3去除玻璃化

2.1.5 RNA-Seq分析

2.1.6 qRT-PCR

2.1.7 透射電子顯微鏡觀察

2.1.8 激光共聚焦顯微鏡觀測及葉綠素含量測定

2.1.9 植物激素代謝組分析

2.1.10 總可溶性蛋白的測定

2.1.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

2.2 結(jié)果與分析

2.2.1 不同PGR組合對脫分化和再分化的影響

2.2.2 饑餓干燥結(jié)合AgNO3處理去除芽叢玻璃化

2.2.3 RNA-Seq分析

2.2.4 qRT-PCR驗證RNA-Seq結(jié)果可靠

2.2.5 黑果枸杞解除玻璃化葉片葉綠體結(jié)構(gòu)恢復(fù)

2.2.6 黑果枸杞解除玻璃化葉片葉綠素含量升高

2.2.7 黑果枸杞解除玻璃化葉片各類植物激素含量變化

2.2.8 黑果枸杞解除玻璃化葉片總可溶性蛋白含量升高

2.3 討論與結(jié)論

2.3.1 討論

2.3.2 結(jié)論

第3章 蔗糖促進黑果枸杞組培無性系枝刺發(fā)生

3.1 材料與方法

3.1.1 試驗材料

3.1.2 黑果枸杞枝刺的發(fā)育觀察

3.1.3 RNA-Seq

3.1.4 qRT-PCR驗證

3.1.5 內(nèi)源糖含量測定

3.1.6 外源蔗糖處理黑果枸杞無刺植株

3.1.7 非代謝性蔗糖類似物和滲透壓調(diào)節(jié)劑處理黑果枸杞無刺植株

3.1.8 摘葉處理黑果枸杞有刺植株

3.1.9 統(tǒng)計分析

3.2 結(jié)果與分析

3.2.1 黑果枸杞刺原基／刺的發(fā)育過程

3.2.2 RNA-Seq分析

3.2.3 qRT-PCR驗證RNA-Seq結(jié)果可靠

3.2.4 海藻糖-6-磷酸(T6P)和蔗糖含量

3.2.5 外源蔗糖促進可見枝刺發(fā)生／發(fā)育

3.2.6 非代謝性蔗糖類似物促進可見枝刺發(fā)生／發(fā)育

3.2.7 摘葉處理抑制可見枝刺的發(fā)生，發(fā)育

3.3 討論和結(jié)論

3.3.1 討論

3.3.2 結(jié)論

第4章 蔗糖促進黑果枸杞組培無性系枝刺發(fā)生初理探索

4.1 材料與方法

4.1.1 試驗材料

4.1.2 噴施外源suc和減少內(nèi)源Suc處理

4.1.3 RNA-Seq分析

4.1.4 RT-qPCR

4.1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

4.2 結(jié)果與分析

4.2.1 增施外源和減少內(nèi)源Suc處理后刺表型變化

4.2.2 RNA-seq建庫、組裝及Unigene功能注釋

4.2.3 差異表達分析

4.2.4 RT-qPCR驗證RNA-seq結(jié)果可靠

4.3 討論和結(jié)論

4.3.1 討論

4.3.2 結(jié)論

第5章 生長素IAA抑制黑果枸杞組培無性系枝刺發(fā)生機理探索

5.1 材料與方法

5.1.1 試驗材料

5.1.2 內(nèi)源激素含量測定

5.1.3 生長素IAA處理有刺枝條

5.1.4 生長素拮抗劑PCIB處理無刺枝條

5.1.5 RNA-Seq

5.1.6 RT-qPCR

5.1.7 統(tǒng)計分析

5.2 結(jié)果與分析

5.2.1 內(nèi)源激素含量

5.2.2 外源IAA和PCIB對枝刺發(fā)生的影響

5.2.3 黑果枸杞RNA-Seq

5.2.4 RT-qPCR

5.3 討論和結(jié)論

5.3.1 討論

5.3.2 結(jié)論

第6章 基于穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化探索LrSUS對黑果枸杞枝刺發(fā)生的影響

6.1 材料與方法

6.1.1 植物材料

6.1.2 LrSUS的克隆和分析

6.1.3 載體構(gòu)建

6.1.4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的黑果枸杞穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化

6.1.5 轉(zhuǎn)化植株DNA提取與鑒定

6.1.6 成功轉(zhuǎn)化植株LrSUS因表達分析

6.1.7 瓶內(nèi)穩(wěn)定轉(zhuǎn)化植株表型測定

6.1.8 穩(wěn)定轉(zhuǎn)化植株移栽及表型測定

6.1.9 超表達植株蔗糖合酶(SUS)活性測定

6.1.10 超表達植株糖含量測定

6.1.11 超表達植株光合參數(shù)測定

6.1.12 RNA-Seq分析

6.1.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

6.2 結(jié)果

6.2.1 LrSUS基因的克隆及序列分析

6.2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)黑果枸杞穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化

6.2.3 穩(wěn)定轉(zhuǎn)化植株的DNA鑒定

6.2.4 穩(wěn)定轉(zhuǎn)化植株LrSUS表達檢測

6.2.5 移栽前后穩(wěn)定轉(zhuǎn)化植株的表型變化

6.2.6 超表達植株蔗糖合酶總活性無顯著變化

6.2.7 LrSUS超表達植株各類糖含量及光合指標(biāo)的變化

6.2.8 RNA-Seq揭示超表達和對照植株之間的DEG

6.3 討論和結(jié)論

6.3.1 討論

6.3.2 結(jié)論

參考文獻

致謝